PCR, ou reação em cadeia da polimerase, é uma técnica usada para amplificar sequências de DNA.Foi desenvolvido pela primeira vez na década de 1980 por Kary Mullis, que recebeu o Prêmio Nobel de Química em 1993 por seu trabalho.A PCR revolucionou a biologia molecular, permitindo aos pesquisadores amplificar o DNA de pequenas amostras e estudá-lo detalhadamente.
PCR é um processo de três etapas que ocorre em um termociclador, uma máquina que pode alterar rapidamente a temperatura de uma mistura de reação.As três etapas são desnaturação, recozimento e extensão.
Na primeira etapa, a desnaturação, a fita dupla de DNA é aquecida a uma temperatura elevada (geralmente em torno de 95°C) para quebrar as ligações de hidrogênio que mantêm as duas fitas unidas.Isso resulta em duas moléculas de DNA de fita simples.
No segundo passo, emparelhamento, a temperatura é reduzida para cerca de 55°C para permitir que os iniciadores hibridizem com as sequências complementares no ADN de cadeia simples.Primers são pequenos pedaços de DNA projetados para corresponder às sequências de interesse no DNA alvo.
Na terceira etapa, extensão, a temperatura é elevada para cerca de 72°C para permitir que a Taq polimerase (um tipo de DNA polimerase) sintetize uma nova fita de DNA a partir dos primers.A Taq polimerase é derivada de uma bactéria que vive em fontes termais e é capaz de suportar as altas temperaturas utilizadas na PCR.
Após um ciclo de PCR, o resultado são duas cópias da sequência de DNA alvo.Ao repetir os três passos durante vários ciclos (tipicamente 30-40), o número de cópias da sequência de ADN alvo pode ser aumentado exponencialmente.Isto significa que mesmo uma pequena quantidade de ADN inicial pode ser amplificada para produzir milhões ou mesmo milhares de milhões de cópias.
A PCR tem inúmeras aplicações em pesquisa e diagnóstico.É usado em genética para estudar a função de genes e mutações, em medicina forense para analisar evidências de DNA, no diagnóstico de doenças infecciosas para detectar a presença de patógenos e no diagnóstico pré-natal para rastrear doenças genéticas em fetos.
A PCR também foi adaptada para uso em diversas variações, como a PCR quantitativa (qPCR), que permite medir a quantidade de DNA, e a PCR de transcrição reversa (RT-PCR), que pode ser usada para amplificar sequências de RNA.
Apesar de suas muitas aplicações, o PCR tem limitações.Requer conhecimento da sequência alvo e do desenho de primers apropriados, e pode estar sujeito a erros se as condições de reação não forem otimizadas corretamente.No entanto, com cuidadosa concepção e execução experimental, a PCR continua a ser uma das ferramentas mais poderosas em biologia molecular.
Horário da postagem: 22 de fevereiro de 2023